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生理生化檢測 - 苯丙氨酸解氨酶(PAL)代測檢測服務

   苯丙氨酸解氨酶(PAL)代測檢測服務

苯丙氨酸解氨酶(PAL)代測檢測服務

     1.測定原理

    苯丙氨酸解氨酶(phenylalanineammonialyase,PAL)催化苯丙氨酸的脫氨反應,使NH3釋放出來形成反式肉桂酸。此酶的在植物體內次生物質(如木質素等)代謝中起重要作用。根據其產物,反式肉桂酸在290nm處吸光度的變化可以測定該酶的活性。

    2.儀器設備

    (1)紫外分光光度計(2)高速冷凍離心機

    (3)研缽(4)移液管:0.5mL1支,1mL3支,2mL1支,5mL1支

    (5)試管:10mL5支(6)恒溫水浴

    3.試劑

    (1)0.1mol·L-1硼酸緩沖液,pH8.8。

    (2)0.02mol·L-1L-苯丙氨酸(用pH8.8硼酸緩沖液配制)。

    (3)提取介質:內含0.05mol·L-1硼酸緩沖液、5.0mmol·L-1巰基乙醇、1.0mmol·L-1EDTA-Na2、5%甘油pH8.3;5%PVP(聚乙烯吡咯烷酮)。

    (4)6mol·L-1HCl。

    4.材料

    正常生長或經誘導處理的水稻、小麥葉片(或黃化幼苗)、馬鈴薯塊莖等植物新鮮組織。

    5.方法步驟

    (1)PAL的提取:取待測植物樣品1-2g,-15冷凍固定后于研缽中加少量的提取介質、少量石英砂,冰浴研磨勻漿,最后用提取介質定容到10mL,攪拌均勻,4層紗布過濾,濾液在4下10000r/min離心15min,上清液即為待測酶液,4保存備用。

    (2)PAL酶活性測定:取4支10mL試管(3支測定管,1支對照管),分別加入0.02mol·L-1L-苯丙氨酸1.0mL(對照管不加,代之為蒸餾水),硼酸緩沖液(pH8.8)2.0mL,酶液1.0mL(根據酶活性適當稀釋或增加體積),總體積4.0mL。搖勻后置30恒溫水浴保溫60min,加0.2mL6mol·L-1HCl終止反應,若有沉淀需過濾或離心。用對照管調零,在290nm處檢測測定管反應液的吸光度A290.

    (3)以測定管反應液每小時A290增加0.01為一個酶活性單位(U):

    式中,Vt:酶液總體積(mL);FW:樣品鮮重(g);Vs:測定時取酶液的量(mL);v:反應液總體積(mL);t:反應時間(h)


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